Преподобный Афанасий Серпуховской, в миру Андрей, родился в Обонежской Пятине в семье священника Авксентия и его супруги Марии. Смолоду склонный к молитвенному самоуглублению и отвержению от мира, он искал достойного наставника в иноческом делании.
В 1374 году, когда князь Серпуховской Владимир Андреевич Храбрый обратился к Преподобному Сергию с просьбой основать монастырь в его вотчине, авва Сергий пришел в Серпухов со своим любимым учеником Афанасием и, заложив монастырь Зачатия Пресвятой Богородицы. благословил преподобного Афанасия быть его строителем, а затем игуменом.

Обитель святого Афанасия была воздвигнута возле города Серпухова, на высоком берегу реки Нары. Ее называли поэтому "обителью на Высоком" или Высоцкой. Отсюда и прозвание, с которым вошел в историю Русской Церкви ее основатель и первый игумен - преподобный Афанасий Высоцкий.
Авва Афанасий ревностно принялся за благоустроение вверенной ему обители. Многие русские подвижники прошли здесь, "на Высоком", высокую школу иночества. По учению аввы Афанасия, сохраненному для нас Епифанием Премудрым, быть иноком - нелегкое дело. "Обязанность инока в том состоит, чтобы бдеть в молитве и в Божественном поучении до полунощи, а иногда и всю ночь; ничего не есть, кроме хлеба и воды, и то с умеренностью; масла же и вина вовсе не употреблять". По словам угодника Божия, многие приходили к нему в обитель на Высоком, "но потом обленились и, не стерпев трудности постнического воздержания, убежали". Тем выше было иноческое достоинство оставшихся со святым аввой подвижников. Потому-то в обитель к своему ученику и спостнику Афанасию Богоносный авва Сергий Радонежский направил для пострижения и наставления в иноческом подвиге своего будущего преемника, преподобного Никона. Преподобный Афанасий учил его: "Иноки называются добровольными мучениками. Святые мученики многие в один час пострадали и скончались, а иноки каждый день терпят страдания не от мучителей, но внутри, от собственной плоти и от врагов мысленных, бывают боримы и до последнего дыхания страдают". Святителю Киприану пришлось в эти годы несколько раз ездить к Константинопольскому патриарху для участия в соборных решениях по управлению Русской Церковью. В одну из этих поездок, по благословению святого аввы Сергия, отправился в Константинополь с митрополитом и его друг, преподобный Афанасий Высоцкий. В Константинополе преподобный Афанасий поселился в обители святого Предтечи и Крестителя Господня Иоанна. Около двадцати лет прожил преподобный в столице тогдашней церковной образованности в неустанных трудах по переводу с греческого языка и переписыванию церковных книг, которые он отправлял затем на Русь, передавая Русской Церкви не только наследие великой православной мысли, но и традиции константинопольских книгописных мастерских, с их изысканной графикой, искусством книжной миниатюры, действенной гармонией содержания и формы. В 1401 г., уже перед самой кончиной, маститый старец переписал, а, возможно, и сам перевел, церковный устав, распространившийся в Русской Церкви под названием "Око церковное".

В непрерывных книжных трудах прошла жизнь преподобного Афанасия. Он скончался в Константинополе в глубокой старости в 1401 г. (или позже этого времени). Русские летописи запомнили его как старца "добродетельного, учительного, знающего Священное Писание", о чем "поныне свидетельствуют писания его". Житие его было написано в 1697 г. иеромонахом Московского Чудова монастыря Карионом (Истоминым).